PCR試劑盒通過模擬體內的DNA復制過程,在體外實現(xiàn)特定DNA的片段快速擴增。該過程包括變性、退火和延伸三個步驟,需用到模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液和輔助試劑等組成的試劑體系。
1.基因表達分析:通過檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異,從樣品中分離出RNA并將mRNA逆轉錄成cDNA,再通過PCR擴增cDNA數(shù)量來確定mRNA的初始水平。
2.基因分型:用于檢測特定細胞或生物體中等位基因的序列差異,如轉基因生物的基因分型。該方法可根據(jù)是否存在擴增子及擴增子長度來檢測遺傳變異。
3.分子克隆:廣泛應用于目標DNA的片段克隆,包括直接PCR克隆和間接PCR克隆。直接PCR克隆是將目標區(qū)域擴增并插入到設計的兼容載體中,而間接PCR克隆則在插入之前對擴增子進行修飾。
4.突變分析:通過PCR克隆將所需突變引入目的基因,進行突變研究。定點突變是通過設計帶有特定堿基置換、刪除或插入的PCR引物來實現(xiàn)的。
5.甲基化分析:利用甲基化特異性PCR(MSP)方法,通過設計兩個引物對來區(qū)分目標位點的甲基化狀態(tài)。首先使用重亞硫酸鹽處理DNA樣品,然后根據(jù)引物配對得到的陽性PCR擴增結果確定位點的甲基化狀態(tài)。
6.測序:為測序富集模板DNA,通常使用高保真PCR來制備測序模板,以保證DNA序列的準確性。在Sanger測序中,PCR擴增片段經純化后用于測序反應。
7.醫(yī)學、法醫(yī)學:PCR技術在臨床診斷、法醫(yī)學調查和農業(yè)生物技術研究中具有廣泛應用。例如,在醫(yī)學中用于基因檢測、致癌突變檢測以及感染性疾病檢測,在法醫(yī)學中用于人類身份鑒定等。